免疫組化試劑盒是一種用于生物樣本分析的工具,常用于檢測(cè)特定抗原或蛋白質(zhì)在組織或細(xì)胞中的分布和表達(dá)。通過(guò)使用這種試劑盒,可以在組織切片或細(xì)胞涂片中標(biāo)記出目標(biāo)分子,從而幫助科學(xué)家、醫(yī)生和研究人員了解疾病的機(jī)制、診斷病理、或研究特定生物標(biāo)志物。 基本原理:
免疫組化技術(shù)通過(guò)抗原-抗體反應(yīng)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。該試劑盒通常包含抗體、顯色劑、抗原修復(fù)液、封閉液等。具體操作是將目標(biāo)抗體(針對(duì)特定蛋白質(zhì)或抗原)與樣本中的抗原結(jié)合,并通過(guò)某種顯色反應(yīng)使目標(biāo)位置顯現(xiàn)出來(lái),最終通過(guò)顯微鏡觀察結(jié)果。
常見(jiàn)應(yīng)用:
病理診斷:通過(guò)免疫組化分析,病理學(xué)家可以識(shí)別癌癥或其他疾病相關(guān)的生物標(biāo)志物。
細(xì)胞研究:檢測(cè)特定蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布。
臨床研究:幫助了解不同疾病狀態(tài)下的分子機(jī)制。
免疫組化試劑盒的使用方法
1.切片,烤片60℃1h。
2.脫蠟及復(fù)水。
3.PBS浸洗3次,每次3min。
4.抗原修復(fù)。(一般來(lái)說(shuō),常見(jiàn)的修復(fù)方式有:EDTA、檸檬酸、蛋白酶K,可根據(jù)一抗進(jìn)行選擇。)
5.PBS浸洗3次,每次3min。
6.30%H2O2(1000μlPBS+200μl30%H2O2)室溫避光孵育15min。
7.PBS浸洗3次,每次3min。
8.加適量山羊血清封閉15min,覆蓋住樣本即可。
9.滴加一抗,4℃過(guò)夜孵育。
10.PBS浸洗3次,每次3min。
11.滴加抗小鼠生物素化二抗(使用濃度為1:100-1:300),37℃孵育1h。
12.PBS浸洗3次,每次3min。
13.滴加HRP標(biāo)記鏈霉親和素三抗(使用濃度為1:100-1:300),室溫孵育30min。
14.PBS浸洗3次,每次3min。
15.DAB顯色5min。(900μlPBS+50μl20xDAB顯色液A+50μl20xDAB顯色液B)
16.蒸餾水浸洗。
17.蘇木素復(fù)染2-3min。
18.用1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒,自來(lái)水返藍(lán)。
19.脫水透明。
20.中性樹(shù)膠封片。